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更新时间:2025-12-30
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AOPI荧光染色法Countess3FL细胞计数仪
在细胞生物学研究、生物制药开发及细胞治疗领域,准确评估细胞群体的总数与活力(活细胞比例)是实验成功与工艺控制的基础。传统的台盼蓝排除法依赖主观镜检,在分辨早期凋亡细胞或检测混杂碎片时存在局限。基于荧光染色的自动化分析技术为此提供了更精准、客观的解决方案。其中,AOPI荧光染色法细胞计数仪Countess3FL系统,即采用AO/PI双荧光染料并通过Countess3FL自动细胞计数仪实现的分析方案,为研究人员提供了快速、可靠的细胞活力定量工具。
AOPI荧光染色法是评估细胞活力的经典荧光方法。其原理基于两种核酸染料:吖啶橙(AO)和碘化丙啶(PI)。AO作为膜通透性染料,可标记所有细胞(活细胞和死细胞)的核酸,发出绿色荧光。PI仅能透过膜受损的死亡细胞,与核酸结合后发出红色荧光,并将AO的绿色荧光淬灭。因此,在双通道荧光检测下,活细胞显示绿色荧光,死细胞显示红色荧光,仪器可据此自动、精确地区分并计数。
一、Countess3FL系统核心规格与工作原理
Countess3FL是ThermoFisherScientific推出的一款支持明场与多通道荧光检测的自动细胞计数仪。当应用于AOPI荧光染色法时,其技术规格确保了检测的准确性与便捷性:
专用的荧光光学通道:仪器配备适用于GFP(绿)和RFP/TexasRed(红)的荧光检测通道,能够匹配AO与PI的荧光光谱,实现高特异性的双色检测。
快速成像与智能分析:系统采用高分辨率CMOS相机,结合自动对焦,可快速捕获清晰的荧光细胞图像。内置的智能算法能自动识别并区分绿色(AO+,总细胞)与红色(PI+,死细胞)荧光信号,直接计算出细胞浓度(cells/mL)和活率(%Viability)。
一体化触摸屏操作:用户无需连接电脑,直接在设备的大尺寸彩色触摸屏上选择“AOPI"检测程序,加载样品后即可在数秒内获得结果,操作流程高度简化。
符合规范的计数腔室:使用一次性Countess细胞计数板,仅需约10-20μL染色后的细胞悬液,避免了载玻片清洗带来的交叉污染风险,符合现代实验室对通量与洁净度的要求。
二、与其它细胞活力检测方法的规格对比
理解细胞计数仪Countess3FL的优势,需要将其与其他常用方法进行对比:
方法/系统AOPI法+Countess3FL台盼蓝排除法+手动计数仅用明场/相位对比的自动计数仪
检测原理双荧光特异性区分:AO标记总细胞,PI特异性标记死细胞,客观性强。染料排斥:台盼蓝被死细胞摄入而显色,活细胞拒染。依赖人工识别颜色差异。形态学分析:基于细胞大小、亮度和对比度进行识别,无法直接区分死活。
结果客观性高:仪器算法自动识别荧光信号,结果一致,无人为主观偏差。较低:依赖操作者经验判断蓝染细胞,不同人员或状态可能产生差异。中等:对形态规则的细胞有效,但对碎片、细胞团或早期凋亡细胞分辨有限。
检测速度与通量快速高效:单个样品约30秒内完成,适合批量样本处理。耗时耗力:手动操作、镜检、计数,通量低。快速:计数速度快,但无法直接获得活率,需结合其他方法。
信息维度同时提供总细胞浓度和活细胞浓度及活率,数据全面。可估算总浓度和活率,但精确度较低。通常只提供总细胞浓度。
对早期凋亡细胞的敏感性较好:PI在细胞膜通透性增加早期即可进入,比台盼蓝更灵敏。较差:台盼蓝对膜完整性早期变化不敏感。无:无法检测。
主要适用场景要求精确活力评估的研究、细胞治疗产品质检、药物毒性筛选、干细胞/原代细胞分析。对精度要求不高的常规细胞培养粗略估算、教学演示。仅需总细胞数的快速筛查,如细胞传代前密度估算。
三、应用场景与选型考量
胞计数仪Countess3FL系统在以下场景中表现出显著价值:
细胞治疗产品放行检测:用于CAR-T细胞、干细胞制剂等活细胞产品的浓度与活率精准测定,满足质量控制要求。
药物毒性或有效性评价:在处理化合物或候选药物后,精确检测细胞活力变化,评估毒性或保护作用。
原代细胞与珍贵细胞培养:在培养易损的原代细胞或干细胞时,进行非侵入性的定期活力监控。
生物工艺开发与监控:在发酵或细胞培养过程中,监测细胞生长状态与活力趋势。
四、选择与使用建议:
明确检测需求:若实验核心是获得精确、可重复的细胞活率数据,尤其是处理敏感或高价值样本时,AOPI荧光染色法配合自动计数仪是更优选择。
评估通量与成本:对于样本量大的实验室,自动化系统能大幅提升效率。需综合考虑仪器、专用计数板和荧光染料的成本。
规范染色操作:严格按照试剂说明书进行AO/PI染色,确保染料浓度和孵育时间合适,以获得信噪比。
定期校准与维护:按照制造商建议维护仪器,确保荧光通道的检测性能稳定。
总结
总而言之,AOPI荧光染色法细胞计数仪Countess3FL系统将经典的荧光活力检测原理与现代化的自动化、智能化分析平台相结合。它通过提供客观、精准且高效的细胞浓度与活力双参数输出,有效克服了传统方法的主观性和局限性。对于致力于细胞治疗、药物发现及细胞生物学研究的实验室而言,采用这一集成化方案不仅是提升数据质量与可靠性的技术升级,也是优化工作流程、应对严谨科研与质控要求的理性选择。在追求细胞分析精准化的道路上,它代表了一个值得投入的专业工具节点。