欢迎访问杭州仟诺生物科技有限公司网站!
销售咨询热线:
17758005454
您的位置: 网站首页 >> 产品中心 >> 细胞株 >> 人源细胞系 > CaEs-17人食管癌细胞
产品名称:

CaEs-17人食管癌细胞

产品型号: 产品时间: 2024-07-28
CaEs-17人食管癌细胞
该细胞公司*,培养状态下的,现货一周供应,我公司可100%保障该细胞的质量,代数年轻活性好,不含有细菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原体 。

产品概述

CaEs-17人食管癌细胞

细胞英文(简称):CaES-17
细胞来源:   ATCC  DSMZ   JCM   ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:食管癌
细胞形态:贴壁;上皮细胞样
细胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:DMEM(高糖) +10% FBS;37℃,5% CO2
传代方法:建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:*培养基50%+40%FBS+10%DMSO
CaEs-17人食管癌细胞

传代细胞培养操作步骤
1、        37度水浴加热所有试剂。
2、        吸取培养培养皿内旧培养液,放置一个干净离心管内。(为稍后终止消化作准备。)
3、        用PBS清洗培养皿,弃去。
4、        向瓶内加入消化液(胰蛋白酶液)。以能覆盖培养瓶底为宜。(一般一个大皿1ml)
5、        2-5分钟后,轻轻震荡培养皿。使细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清(即原培养液)终止消化。
6、        收集细胞悬液,880转/分、5分钟离心,弃去上清液。
7、        加培养液至1ml,混匀后取10ul计数细胞。
8、        根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中,再加入相应体积的培养液。(90mm大皿是9ml,中皿好像是4mm,6孔板和小皿是2ml,96孔板是100ul)。
9、        接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈,使细胞排列均匀。
10、        放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤:
1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许,用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察,计算计数板八大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算:
细胞数/ml=8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏:
冻存和复苏的原则:慢冻快融
当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶很大,大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。
 1.冻存细胞
(1)选对数增生期细胞,在冻存前1d换液。
(2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×106/m1左右密度,离心,去上清。
(3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO) 或甘油,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤
(4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m1悬液。
(5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,作好标记。
(6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40 min时间内,下降到液氮表面,再停30 min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。
标准程序:
当温度在-25℃以上时, 1~2℃/min
当温度达-25℃以下时, 5~10℃/min
当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中
简易程序:
将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2℃的速度,在40分钟内降至液氮表面,停30分钟后,直接投人液氮中。
  操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
(1)从罐中取出冻存管。
(2)迅速放入37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成。
(3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
(4)低速离心(880r/min) 5 min,去上清后再用培养液洗一次。
(5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。
  冻存细胞数量要充分,密度应达到107/m1,在融后稀释20倍后,仍能保持5×105/m1数量。

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
分享到:
版权所有©2018 杭州仟诺生物科技有限公司 备案号:浙ICP备18056619号-1
  • 扫一扫,关注我们