HNE2人鼻咽癌细胞

HNE2人鼻咽癌细胞

含量：>1x106 个/mL

污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

培养基：90%RPMI-1640+10%FBS

生长特性：贴壁生长

运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。               

培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备基础培养基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠 0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

HNE2人鼻咽癌细胞
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜*培养基，第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基，培养观察
3.若出现生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养

贴壁细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1.吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加适量0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间）
2.镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的*培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存