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产品名称:

HL-1小鼠心肌细胞

产品型号: 产品时间: 2018-12-12
HL-1小鼠心肌细胞
该细胞公司*,培养状态下的,现货一周供应,我公司可100%保障该细胞的质量,代数年轻活性好,不含有细菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原体 。

产品概述

HL-1小鼠心肌细胞

生长特性:    □ 贴壁   □ 悬浮   □悬浮+贴壁

细胞生长条件:

培养条件   

      DMEM(高糖)+10%FBS+1%双抗

温度                   

             37℃

空气条件  

           5% CO2,95% AIR

传代方法

1:2传代,2~3天换液

冻存条件

90%FBS+10%DMSO

二.使用方法

按照以下方法进行操作

取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶拆下封口膜,放入37,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代

2、细胞传代:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min

3)弃上清,沉淀细胞用12ml*培养基重悬然后1:2比例进行分瓶传代,最后放入375%CO2胞培养箱中培养

4)待细胞*贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代

3、细胞冻存:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min

3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;

4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37水浴中解冻,直至冻存管中结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml*培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min

3)弃上清,沉淀用5ml*培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

4)第二天,换用新鲜*培养基继续培养。

HL-1小鼠心肌细胞
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜*培养基,第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基,培养观察
3.若出现生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养

贴壁细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作
1.吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加适量0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间)
2.镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml *培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的*培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存

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