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产品名称:

HCC-78人肺腺癌细胞

产品型号: 产品时间: 2018-12-12
HCC-78人肺腺癌细胞
该细胞公司*,培养状态下的,现货一周供应,我公司可100%保障该细胞的质量,代数年轻活性好,不含有细菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原体 。

产品概述

HCC-78人肺腺癌细胞

【中文缩写】    HCC-78细胞

 【背景资料】    见细胞说明书

 【产品来源】    细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系

     提供贴壁、半贴壁、悬浮、半悬浮、贴壁与悬浮混合等细胞特性,一般细胞培养PBS量是10%,如果出现细胞状态不良情况,可以提高PBS量到15%,待细胞稳定后,调回PBS量10%,对于初次实验者,一般细胞培养,都需要加入双抗防止细胞污染,细胞汇合度达到90%,我们开始寄送,细胞这样可以保持细胞收到时,良好的细胞活力。复苏细胞注意事项:

1收到细胞后当天换液,全部更换成客户自己的新鲜培养基,放进培养箱,第二天再消化。

2边观察边消化,根据细胞的形态,终止消化时间,采取以半分钟间隔吹打细胞边缘,如可吹打下来,即终止消化。客户摸索比较好的消化时间。

3随细胞有一份细胞操作说明书,请客户仔细查看。

4记得加1%双抗,降低被污染的概率。另外尽早冻存留种,以备后用。

5售后时间为一周,仅限于细胞本身的质量问题,而因乙方自己不当操作(不规范操作,消化过度,不加双抗导致的污染等)导致的细胞问题不在售后范畴。

6收到细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请您务必重视。

7刚收到细胞时,胎牛血清可以用15%培养两三天,利于细胞尽快恢复状态,细胞状态稳定后,再调回10%即可。

(其中1,2条针对于贴壁细胞,悬浮细胞详情请见细胞操作说明书)"   

    复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管(两支)

        【产品规格】    1*10(6)

        【安全级别】    1

        【产品种属】    人

        【组织来源】    肺

        【细胞形态】    上皮细胞样

        【细胞特性】    贴壁

"细胞培养基的选择和使用:

MEM:成分简单,细胞贴壁细胞

DMEM:分高糖型和低糖型。

IDMEM:适合细胞密度低,生长困难的细胞。如杂交细胞的筛选,DNA转染后转化细胞的筛选培养。

RPM1640:应用*泛的培养基之一。悬浮细胞培养,主要针对淋巴细胞,也适合其他细胞。

199、109培养基:成分齐全,培养效果较好。

F10培养基:适合小鼠及人类二倍体细胞培养。

F12培养基:适合单细胞分离培养及无血清培养。

McCoy’s5A培养基:特别适合原代细胞及较难培养细胞的生长。"    95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)

           细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

        【培养条件】    详见细胞说明书

        【传代方法】    建议1:2-1:3 两天换液一次

        【冻存条件】    详见细胞说明书

        【主要文献】    请具体查阅相关发表文章

细胞传代培养的胰酶消化法:

传代培养:是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移,接种到另一培养瓶的培养。传代细胞,可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代,部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。

HCC-78人肺腺癌细胞

培养步骤

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备基础培养基( GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸钠 0.11g/L);优质胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

细胞注意事项:

1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。

3.静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

4.  悬浮细胞:将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内,1000 转/分钟离心5min,培养基上清可备用,管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养;若密度未超过80%,细胞悬液移至原瓶继续培养,待达到80%时再正常传代。备注:聚团生长慢,有密度依赖,必须使用T25培养瓶竖立培养,3天一次半量换液一次,1-2周传代一次

贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。备注:细胞贴壁慢,传代后细胞放2天不动

5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。

 

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