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产品名称:

FADU/DDP 200人咽鳞癌细胞顺铂耐药株

产品型号: 产品时间: 2024-07-28
FADU/DDP 200人咽鳞癌细胞顺铂耐药株
该细胞公司*,培养状态下的,现货一周供应,我公司可100%保障该细胞的质量,代数年轻活性好,不含有细菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原体 。

产品概述

FADU/DDP 200人咽鳞癌细胞顺铂耐药株

品牌:DG产地:中国
英文名称:FADU/DDP 200保质期: 
保存条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃

FADU/DDP 200人咽鳞癌细胞顺铂耐药株

 操作步骤:

1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。

 2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。      
     1. 
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
     2.  1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。     
     3. 
 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加1-2mL 培养液后吹匀。
     4. 将细胞悬液按 1比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
 3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
    1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
    2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
    3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

 注意事项:

1.动作要快,胰酶消化,换液什么,细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外,要掌握好胰酶消化时间,所谓的细胞状态差,很多时候是传代的原因。
3.有时间的话,需要细胞计数,传相应数目的细胞到培养皿中,可以大致清楚细胞的生长曲线,不会临时要处理,手足无措。
3.要做什么心里要非常清楚,合理安排时间,细胞房的实验穿插进行,可以节省很多时间,也不会耽误别人的实验。
4.个人的实验器具自己收一套,不要和别人混用,zui近换了什么新的东西稍微记一下,试剂一旦怀疑污染,马上丢。
5.细胞房不能进去太多人,避免相互干扰。

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