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发布时间:2024/5/24
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培养基的制备步骤可以因培养基的类型和用途而有所不同。以下是一般培养基(如LB培养基、DMEM培养基等)制备的基本步骤:
一般步骤
1. 准备材料
培养基粉末或成分:根据需要选择合适的培养基类型(例如LB、DMEM等)。
去离子水:用于溶解培养基粉末。
pH试纸或pH计:用于调整pH值。
盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH):用于调节pH值。
灭菌器材:高压灭菌锅、滤膜等。
培养基瓶或培养皿:用于储存和培养。
2. 称量
根据培养基配方,精确称量培养基粉末或各个成分的重量。
3. 溶解
将称量好的培养基粉末或成分加入适量去离子水中。
搅拌混合直至溶解。如果使用加热搅拌器,可加热至适当温度以加速溶解。
4. 调节pH值
使用pH试纸或pH计测量培养基溶液的pH值。
根据需要,加入盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH)逐滴调节pH值,直到达到所需的pH值(通常为7.2-7.4)。
5. 定容
将培养基溶液定容至所需体积。例如,如果配制1升培养基,将溶液加去离子水定容至1000毫升。
6. 灭菌
将培养基溶液分装到培养基瓶中,松开瓶盖。
将装有培养基的瓶子放入高压灭菌锅中,在121°C下灭菌15-20分钟。
对于不耐热的成分,可在灭菌后使用无菌技术通过滤膜过滤加入培养基中。
7. 冷却
灭菌后,取出培养基瓶,紧闭瓶盖,放置冷却至室温。
8. 储存
将冷却后的培养基储存在4°C的冰箱中,短期内使用。
特殊培养基的制备
对于一些特殊培养基,如血琼脂培养基或选择性培养基,制备步骤可能会有所不同,需要添加特定成分(如血液、抗生素等),并且有时这些成分需要在培养基冷却到一定温度后再加入,以避免热灭活。
注意事项
无菌操作:在制备和处理培养基时,尽量在无菌环境中操作,以防止污染。
精确配比:确保所有成分按配方精确称量,避免误差影响实验结果。
记录配制过程:详细记录每次培养基制备的配比、pH值、灭菌条件等信息,以便后续实验追踪和重复。
通过严格按照步骤操作和保持无菌环境,可以确保培养基的质量和实验结果的可靠性。



