​ProFlex 2x96 PCR使用教程

ProFlex  2x96 PCR使用教程

    ProFlex2x96PCR仪是ThermoFisher推出的双模块PCR系统，它配有两个独立的96孔加热模块。这意味着你可以把它当成两台的PCR仪来使用——一个模块跑常规扩增，另一个模块同时做梯度优化，互不干扰。对于样本量大、实验类型多的实验室来说，这种设计能节省不少排队等待的时间。

    那么，ProFlex2x96PCR使用教程的核心是什么？简单来说，就是学会为两个模块分别设置程序、分别装载样品、分别启动运行，同时掌握每个模块自带的梯度功能。掌握了这套操作逻辑，就能充分发挥双模块并行的效率优势。

先看整体流程：四步完成一次双模块PCR实验

    在深入展开每个操作细节之前，先用一个框架概括ProFlex2x96PCR使用教程的整体思路：

    第一步，开机与准备——接通电源，检查两个模块的状态，清洁模块孔，准备PCR管或96孔板。第二步，分别为两个模块创建程序——通过触摸屏为模块A和模块B各自设置温度步骤、循环参数，需要时开启梯度功能。第三步，装载样品并启动运行——将反应液加入对应模块的PCR管或96孔板中，关闭热盖，确认参数后分别启动两个模块。第四步，运行结束与收尾——分别取出样品，查看运行记录，清洁仪器。

    这四步环环相扣，关键是每个模块的操作相互独立。以下逐一拆解每个环节的具体操作。

一、开机与准备工作

    ProFlex2x96PCR使用教程的第一步，是做好开机前的检查和准备。

    接通电源并开机。确认电源线连接稳固，按下前面板的电源开关。系统启动后，触摸屏会进入主界面。主界面上清晰显示模块A和模块B的状态图标，每个模块都有独立的温度显示和运行状态。

    检查模块与热盖。打开两个模块的热盖，分别目视检查96孔模块内是否有异物或上次实验残留的样品。如有需要，用柔软的无尘布蘸取少量70%乙醇轻轻擦拭模块孔内壁，晾干后再关闭热盖。两个模块需分别清洁，不可混用清洁工具。

    准备耗材。ProFlex2x96的每个模块均兼容0.1mL和0.2mLPCR单管、8联管以及标准96孔板。根据实验通量选择合适的耗材类型。确保所用管材规格正确，盖紧管盖或封好封板膜，防止运行中液体蒸发。

二、创建与设置PCR程序

    程序设置是ProFlex2x96PCR使用教程的核心内容。两个模块的程序设置独立，你需要分别点击进入各模块的编辑界面。

    新建程序。在主界面点击模块A的图标，进入该模块的操作界面，选择“新建程序"。输入程序名称后，开始编辑温度步骤。屏幕上会显示一个步骤表格，每一行代表一个温度阶段。

    设置温度与时间。典型的PCR程序包括预变性（如95°C、5分钟），然后是循环步骤（95°C变性、55°C退火、72°C延伸，各30秒），最后是延伸（72°C、5分钟）和4°C保持。点击每一行的温度和时间数值，通过弹出的数字键盘输入目标值。

    设置循环。在编辑界面中，点击“添加循环"，输入循环次数（通常为25-35个循环），然后将需要重复的步骤拖入循环体内。ProFlex2x96支持嵌套循环，对于降落PCR等复杂程序也能灵活设置。

    为模块B设置程序。返回主界面，点击模块B的图标，重复上述步骤，为模块B设置相同或不同的程序。例如，模块A设置一个标准的55°C退火程序用于常规扩增，模块B设置一个梯度程序用于新引物的退火温度优化。两个模块同时工作，这就是ProFlex2x96PCR使用教程中强调的并行优势。

    使用梯度功能优化退火温度

    每个96孔模块都支持独立的3区梯度功能，可在同一块板上同时测试三种不同的退火温度。

    设置梯度。在某个模块的程序编辑界面中，找到退火步骤，点击“梯度"选项。输入目标温度范围——例如将中间区域设为55°C，相邻两个区域可分别设为53°C和57°C，温度差异在1-5°C之间可调。96孔板被划分为三个纵向区域，每一区域的退火温度独立控制。

    这项功能在新引物优化时非常实用，一次运行就能锁定理想的退火温度。

    调用已存储程序。如果之前已将常用程序保存在仪器中，可在主界面点击“打开"或“程序库"，从列表中选择目标程序直接调用。两个模块可分别调用不同的已存程序。

三、装载样品与启动运行

    程序设置完毕后，ProFlex2x96PCR使用教程进入实际操作阶段。

    加样。将配制好的PCR反应液分装至PCR管或96孔板中。使用多道移液器可提高96孔板的加样效率。加样时避免产生气泡，如有气泡可短暂离心排除。确认管盖已盖紧或封板膜已压实。两个模块的样品可分别准备，互不影响。

    放入模块。打开对应模块的热盖，将PCR管或96孔板放入模块中。确保管或板嵌入模块孔内，与加热面充分接触。96孔板方向应与模块标识一致。分别装载模块A和模块B的样品。

    关闭热盖并启动。分别压下两个模块的热盖，确认锁扣到位——热盖未关闭时，对应的模块不会启动加热程序。回到触摸屏界面，确认各模块程序参数无误后，可分别点击各模块的“Start"按钮启动运行。两个模块的启动时间可以不同，独立。

    运行中的监控。运行过程中，触摸屏可随时切换查看两个模块的实时温度、剩余时间和循环进度。ProFlex2x96支持通过ThermoFisherConnect平台远程监控，用户可在电脑或平板上查看两个模块的运行状态。运行期间不要打开热盖，以免影响温度控制和扩增效率。

四、运行结束与收尾

    扩增程序结束后，各模块会自动降至4°C或室温保持。ProFlex2x96PCR使用教程中，收尾步骤同样值得重视。

    取出样品。分别打开两个模块的热盖，小心取出PCR管或96孔板。注意热盖和模块表面可能仍有余温，避免烫伤。两个模块可分别取样，互不影响。

    查看运行记录。如需追踪本次实验的温度变化曲线，可在触摸屏进入对应模块的运行记录界面查看详细数据。这些信息有助于在实验结果出现异常时排查温度控制方面的问题。

    清洁与关机。取出样品后，分别检查两个模块孔内是否有冷凝水或溅液。如有，用无尘软布蘸取70%乙醇轻轻擦拭，晾干后关闭热盖。如果当天不再使用，可关闭电源开关。

五、日常维护与保养

    规范的日常维护是延长仪器使用寿命、保持ProFlex2x96PCR使用教程中各模块性能稳定的基础。

    每次使用后：用无尘软布蘸取少量70%乙醇，分别擦拭两个模块的孔内壁和热盖内侧，去除残留物和冷凝水。不要使用强溶剂或研磨性清洁剂。定期检查：每月检查两个模块的热盖密封圈状态，如有老化、变形或裂纹应及时更换。温度校准：建议每年对两个模块分别进行一次温度验证，如发现某模块实验结果持续异常，可联系售后进行专业校准。长期不用时：关闭电源，拔掉插头，用防尘罩覆盖。再次启用前，先运行一次空载程序，确认两个模块升降温均正常。

总结

    ProFlex2x96PCR使用教程，归纳起来就是“两个模块分别设程序、分别装样品、分别启动、分别清洁"的独立操作逻辑。双96孔模块的设计让这台仪器既能联手处理192个样本的大通量实验，也能分开运行两种不同的PCR程序，相当于两台PCR仪。掌握了每个模块的独立操作方法和梯度功能，就能在日常实验中灵活调度，让高通量和多任务并行成为常态。规范操作、定期维护，是保持设备稳定运行、延长使用寿命的有效途径。

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