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更新时间:2026-04-28
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Nanodrop one超微量分光光度计量程
NanoDropOne是赛默飞世尔科技出品的一款超微量紫外-可见分光光度计,在工作原理上与其它NanoDrop家族成员一脉相承。它利用表面张力将1-2微升的样品“固定"在上下基座之间,形成一个无需比色皿的光路。同时,它通过自动调节光程技术,能够测量从低浓度到高浓度的样品,无须手动稀释。其波长范围横跨190至850纳米,从核酸、蛋白质到纳米颗粒都能测量。凭借这些技术,NanoDropOne将dsDNA的检测下限推至2.0纳克/微升,上限更可达27,500纳克/微升,覆盖了四个数量级的浓度范围。
一、量程总览:宽泛、精准、多模式
在深入细节之前,我们先快速浏览一下NanoDropOne的核心量程数据,这会让你对它的能力有一个整体认识。
dsDNA(双链DNA):这是实验室最常测量的分析物,基座模式下为2.0-27,500纳克/微升。
BSA(牛血清白蛋白):作为蛋白质定量的通用标准,它的基座量程是0.06-820毫克/毫升。
IgG(免疫球蛋白G):另一种常见的蛋白标准,基座量程为0.03-400毫克/毫升。
这些参数清晰地表明,NanoDropOne是一台为“微量"和“高浓度"而生的仪器,旨在简化你的实验流程。
为什么量程如此重要:解读关键参数
量程决定了这台仪器能在哪些实验环节发挥作用。对于NanoDropOne来说,理解“微量"和“宽动态范围"这两个概念至关重要。
“微量"的真正含义:这里的“微量"指样品体积微小,仅需1-2微升。这意味着你可以节省宝贵的样本,避免因稀释而引入误差或污染。
“宽动态范围"的价值:“宽动态范围"意味着仪器既能准确测量接近检测下限的稀薄样本,也能测量刚从纯化柱上洗脱下来的高浓度样本。你无需为了“进入仪器的线性范围"而反复稀释、测量、计算,从而提高了工作效率和结果的可信度。
不同分析物的量程详解
当然,实验室的工作远不止测量dsDNA。NanoDropOne也为其他常见的分析物预设了方法,并有其对应的量程。
蛋白质定量:对于纯化蛋白,可以通过测量其在280纳米波长的吸光度(A280)来定量。如上文所述,BSA和IgG的量程很宽,覆盖了从稀溶液到高浓度浆液的广泛范围。除了A280法,它也支持BCA、Bradford等比色法,通过标准曲线进行定量。
其他核酸:虽然我们常用dsDNA作为标准,但仪器也广泛应用于ssDNA(单链DNA)和RNA的定量。其检测原理相同,均基于260纳米处的吸光度,因此量程水平与dsDNA类似。一个实用技巧是,NanoDropOne内置的Acclaro™软件能够自动识别并校正RNA样本中的DNA污染,让你对RNA的纯度有更准确的评估。
肽段、荧光染料及其他:这款仪器的能力远不止于此。它可以在205纳米处测量肽段浓度,也可以测量Cy3、Cy5等荧光标记物的标记效率,甚至可以测量细菌培养液在600纳米处的光密度(OD600)来评估细胞生长密度。这使其成为分子克隆、蛋白质纯化、细胞生物学等多个领域的通用工具。
测量模式对量程的影响:基座vs.比色皿
一个可能被忽视的细节是,NanoDropOne的量程会根据你所选的“基座"或“比色皿"模式而有所不同,尤其对于NanoDropOneC型号。
基座模式:这是NanoDrop经典使用方式,也是上面讨论的量程。它利用表面张力形成光路,适合快速、常规的测量,尤其适合中高浓度的样品。
比色皿模式:NanoDropOneC型号额外配备了一个比色皿架。使用比色皿的优势在于可以测量更低浓度的样品。例如,对于dsDNA,比色皿的检测下限可以从基座的2.0纳克/微升降至0.2纳克/微升。这使得OneC在对低浓度样品进行精准定量,或进行需要精确控温的动力学实验时,更有优势。
自动调节光程技术:拓宽量程的智慧
NanoDropOne之所以能拥有如此宽泛的量程,其核心在于“自动调节光程"技术。传统分光光度计使用1厘米固定光程的比色皿,其有效测量范围相对较窄。NanoDropOne则集成了0.03、0.05、0.1、0.2和1毫米这5个不同光程的微孔。测量时,仪器会根据样品的吸光度,自动上下调节基座,选择最合适的光程进行精确测定。这一技术真正实现了“浓的不用稀释,淡的测得更准"。
二、量程之外的考量:使用注意事项
为了让你手中的NanoDropOne能持续、稳定地提供准确数据,有些使用细节值得留心。
低浓度样品的局限性:当样品浓度在检测下限附近时,仪器的测量误差会增大。如果你需要精确测量极低浓度的核酸或蛋白(例如低于2纳克/微升的DNA),建议使用Qubit荧光计等灵敏度更高的方法进行验证。
维护与校准:定期的清洁和校准是数据准确性的保障。每次使用前后,需要用无尘纸蘸取去离子水清洁基座,防止交叉污染。建议每6个月使用厂家提供的CF-1标准液进行一次性能验证校准,确保仪器状态良好。
总结
样品本身的影响:样品的纯度直接影响测量的准确性。建议样品的A260/A280比值应在1.8-2.0(DNA)或2.0(RNA)左右,A260/A230比值应大于2.0,以排除蛋白或盐离子的干扰。对于高粘度或含有大量气泡的样品,也可能影响液柱的形成,需要充分混匀或短暂离心后再进行测定。
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